邦霉解ANSB060对采食被黄曲霉毒素污染花生粕 肉鸡生产性能及健康的影响
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作者:pro0dd51f
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发布时间: 2019-10-24
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邦霉解ANSB060对采食被黄曲霉毒素污染花生粕
肉鸡生产性能及健康的影响
1前言
黄曲霉毒素是黄曲霉、寄生曲霉、黑曲霉等霉菌产生的次级代谢产物。具有强烈的致癌、致畸、致突变以及免疫抑制作用，对人类以及动物的生存造成了极大的威胁。采食了被黄曲霉毒素污染的饲料后，动物会产生嗜睡、厌食、生长受阻、饲料利用率降低等症状。对于人类，长期低剂量的接触黄曲霉毒素会导致肝癌的发生。
中国是黄曲霉毒素污染最严重的国家之一。粮食作物在收割、运输以及储藏的过程中极易被黄曲霉毒素污染。而且，由于黄曲霉毒素的理化性质很稳定，物理或者化学的去毒方法有很大的局限性，例如饲料养分的流失严重、适口性变差、能耗高并且所需的设备价格昂贵。种种这些不利因素，使人们越来越重视生物降解黄曲霉毒素。很多的微生物都被证实具有降解黄曲霉毒素的作用，例如Stenotrophomonas maltophilia, Mycobacteriumis, Trichoderm viride, Aspergillus parasiticus和 Mucor ambiguous。
但是已证明具有降解黄曲霉毒素功能的微生物菌株，大多都不可以直接使用在饲料中。基于这种情况，本课题组筛选出一株具有同时降解黄曲霉毒素B1、G1以及M 1的枯草芽孢杆菌。命名邦霉解ANSB060，其对这三种毒素的72h降解率达到了81.5%，80.7%以及60%。不仅如此，ANSB060还具有显著的益生性，能够抑制大肠杆菌、沙门氏菌以及金黄色葡萄球菌这三种在畜牧业生产最影响最为严重的有害微生物；并且能够较好的抵抗胃酸以及胆盐，在胃肠道中具有较高的芽孢存活率。
为了进一步将黄曲霉毒素生物降解剂进行规模化推广和应用，本研究的目的是探讨肉鸡在采食了被黄曲霉毒素污染的饲料后，邦霉解ANSB060对其生长性能以及健康的保护作用。
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1霉菌毒素生物降解剂
邦霉解ANSB060为经工业化发酵及干燥后的枯草芽孢杆菌及其发酵液，同时添加了免疫增强酶以及中草药提取物等能够增强动物机体免疫力的生物活性物质。
2.1.2试验动物及其管理
试验共选用420只体重接近的7日龄的罗斯308肉公鸡，随机分为7个处理，每个处理6个重复，每个重复10只肉公鸡。饲养试验在中国农业大学河北涿州实验基地进行。肉鸡用镀锌铁丝笼笼养，按常规饲养管理进行，烟道加热保温。试验全程，肉鸡自由采食饮水。
肉鸡免疫程序接种：7日龄，点眼新支二联苗。13日龄，滴嘴法氏囊免疫。18日龄，饮水免疫新支二联苗。27日龄，饮水免疫法氏囊。35日龄，饮水免疫新城疫-clone30。
2.1.3主要仪器设备
752 分光光度计 上海精密科学仪器厂
C-LM3嫩度计 北京朋利驰科技有限公司
SC-8C型全自动色差计 北京康光仪器有限公司
PHB-10B型pH计 上海康仪仪器有限公司
2.2试验设计
试验共分为7个处理，其中C（正对照组）组饲喂正常玉米豆粕型基础日粮，含有21%正常花生粕，未检测到任何霉菌毒素残留（包括黄曲霉毒素、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮以及赭曲霉毒素），基础日粮配方及营养成分含量见表1-1，其中营养成分含量为实测值。负对照组T是用等量霉变的花生粕替代基础日粮中正常的花生粕，T+500BMJ、T+1000BMJ以及T+2000BMJ是在处理组T的基础上，再分别添加500 g/t 、1000 g/t 以及2000 g/t 的邦霉解ANSB060；处理组C+500BMJ以及C+1000BMJ则是在基础日粮中分别添加了500 g/t 和1000 g/t 的邦霉解ANSB060，试验设计及分组见表1-2。
本研究中所使用的发霉花生粕是课题组在全国范围内采样、检测、确定的，共采集约180个饲料原料和配合饲料，分别测定黄曲霉毒素、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮以及赭曲霉毒素含量，选取仅被黄曲霉毒素污染且污染程度严重的原料。经测定试验所选用的霉变花生粕其AFB1含量为330.0µg/kg， AFB2含量为80.1µg/kg， AFG1含量为30.2µg/kg， AFG2含量为7.1µg/kg，其他种类毒素玉米赤霉烯酮为15.1µg/kg ，呕吐毒素和赭曲霉毒素均未检出，检测方法参见Trucksess et al。同时对霉变花生粕和正常花生粕的营养成分进行测定，以使日粮配制时各处理组日粮营养成分没有显著性差异，配制好的各组试验日粮的对比照片见图1-1.
图1-1 霉变花生粕与正常花生粕对比照片
Figure1-1 Photos of normal and moldy peanut meal
注：组1、3及4，使用的是正常花生粕；组2、5、6及7使用的是发霉花生粕。
试验共进行5周，新孵育出的小鸡经一周（7天）对环境的适应后，开始饲喂正对照组试验日粮。7天时正式试验，试验开始后每周称重结料，记录鸡只采食量，体重变化，计算日增重及料肉比。
2.3试验方法
2.3.1样品采集
在试验开始后的第5周最后一天，每个重复选取2只体重在平均值附近的肉鸡进行取样，每个处理共屠宰12只鸡，在禁食12小时后，翅下采血、宰杀。收集到的血液经离心后分离出血清，放入-20℃的冰箱保存，用来测定总蛋白（TP）和白蛋白(ALB)含量，谷草转氨酶（GOT）以及谷丙转氨酶(GPT)活性。
屠宰后剥离心脏、肝脏、脾脏、法氏囊以及胸腺并称重，研究不同的处理对免疫器官以及脏器发育的影响。
完整剥离鸡的右侧腿肌及胸肌，用于测定肉品质指标，包括蒸煮损失、剪切力、pH值以及肉色。
表1-1 基础日粮配方及其营养成分含量
Table 1-1 Basal diet formulations and nutritional contents
|
原料名称 |
组成（%） |
营养水平 |
|
|
东北玉米 |
57.70 |
粗蛋白（%） |
21.48 |
|
国产膨化大豆 |
6.00 |
禽代谢能MC/Kg |
3.01 |
|
涿州豆粕 |
8.20 |
钙（%） |
0.99 |
|
正常花生粕 |
21.00 |
总磷（%） |
0.65 |
|
石粉 |
1.30 |
非植酸磷（%） |
0.43 |
|
磷酸氢钙 |
1.80 |
蛋氨酸（%） |
0.62 |
|
食盐 |
0.30 |
蛋胱氨酸（%） |
0.91 |
|
大豆油 |
2.00 |
赖氨酸（%） |
1.15 |
|
赖氨酸[98.5%] |
0.47 |
色氨酸（%） |
0.21 |
|
DL-蛋氨酸 |
0.36 |
苏氨酸（%） |
0.81 |
|
苏氨酸 |
0.19 |
|
|
|
复合多维 |
0.03 |
|
|
|
氯化胆碱 |
0.10 |
|
|
|
肉鸡--微量 |
0.30 |
|
|
|
盐霉素 |
0.07 |
|
|
|
15%金霉素 |
0.07 |
|
|
|
沸石粉 |
0.11 |
|
|
|
合 计 |
100.00 |
|
|
复合多维：每千克含VA 10000IU; VD3 2000IU,VE 20mg，VK 3mg, VB1 2.5mg，VB6 0.4mg,VB12 0.015mg，烟酸 25mg，VB5 8mg，叶酸 1.2mg，氯化胆碱450mg。
肉鸡--微量：每千克含铜 15mg，铁 30mg，锌80mg，锰80mg，碘 1.5mg和硒 0.3mg。
表1-2 试验设计及分组
Table 1-2 Experimental design and grouping
|
分组 |
日粮 |
AFB实测值 |
|
|
C |
基础日粮+21%正常花生粕（正对照） |
未检测到 |
|
|
T |
基础日粮+21%霉变花生粕（负对照） |
AFB1含量为70.12µg/kg， AFB2含量为13.1µg/kg |
|
|
C+500BMJ |
基础日粮+21%正常花生粕+500g/t 邦霉解ANSB060 |
未检测到 |
|
|
C+1000BMJ |
基础日粮+21%正常花生粕+1000g/t 邦霉解ANSB060 |
未检测到 |
|
|
T+500BMJ |
基础日粮+21%霉变花生粕+500g/t 邦霉解ANSB060 |
AFB1含量为69.30µg/kg， AFB2含量为10.1µg/kg |
|
|
T+1000BMJ |
基础日粮+21%霉变花生粕+1000g/t 邦霉解ANSB060 |
AFB1含量为72.10µg/kg， AFB2含量为11.1µg/kg |
|
|
T+2000BMJ |
基础日粮+21%霉变花生粕+2000g/t 邦霉解ANSB060 |
AFB1含量为71.46µg/kg， AFB2含量为9.63µg/kg |
|
2.3.2指标测定
2.3.2.1血清蛋白及酶
总蛋白（TP），白蛋白(ALB)，谷草转氨酶（GOT）以及谷丙转氨酶(GPT)的测定均是使用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定。具体的测定方法根据试剂盒所提供的说明书进行。
2.3.2.2肉品质的测定方法
蒸煮损失
将取下的肉样称重（水浴前重），然后将肉样置于塑料袋内，密封并且抽去袋内空气，使肉样表面与塑料袋紧贴。将肉样袋置于80℃水浴中，加热至肉样中心温度达到70℃后取出，放置至室温，除去肉样表面水分后称重（水浴后重）。
蒸煮损失（%）=（水浴前重-水浴后重）/水浴前重×100
剪切力
用塑料袋将肉样密封，于80℃水浴中加热大约10 min，直至肉样内部温度达到75℃后取出，观察肌纤维走向，并且按肌纤维走向切成直径约为1.27cm的肉条。测样时，刀口与肌纤维走向垂直。
以牛顿力为单位。每个肉样测试三次，分别记录读数，取其平均值。
肉色
采用CIELAB系统（CIE，Commission Internationale de 1’ Eclairage, 1976）,分别使用L*、a*以及b*表示肉色的不同水平，其中L*表示亮度，肉色的亮度越高，L*值越高；b*代表黄度，肉的黄度越高，其值越大；a*表示红度，其值越高表示红度越高。
屠宰后，根据Fletcher的方法，使用全自动色差计立即测定肉鸡胸肌、腿肌的L*、a*以及b*值。每块肌肉在相对固定的部位表面测定3次，取平均值。
测定时要避免肌肉的表面破损或者出血点，以免试验结果不准确。
pH值
肌肉的pH值分别在屠宰后的第45分钟以及24小时时测定，测定时，将pH计的探针刺入右侧胸肌前部约2.5cm深处，读取数据。
在正式测定前，pH计需进行校正，分别使用pH4.0以及pH7.0的标准缓冲溶液进行校对。每个样品测定三次，取平均值统计用。
2.4统计分析
显著性统计采用SAS 9.0的一般线性模型（GLM）进行统计分析，差异显著时采用Duncan’s多重比较。
3试验结果
3.1邦霉解ANSB060对饲喂黄曲霉毒素霉变花生粕肉鸡生产性能的影响
表1-3显示，在试验开始的前两周，从第7天至21天期间，肉鸡各处理与正对照的21日龄体重、平均日采食量、平均日增重以及饲料转化效率差异不显著（P＞0.05）。
表1-4表示，在42日龄，负对照肉鸡体重显著低于正对照组（P＜0.05），而在霉变花生粕日粮中添加邦霉解ANSB060均可提高肉鸡体重，尤其在T+1000BMJ以及T+2000BMJ这两个处理中，肉鸡体重显著高于负对照组（P＜0.05）。日粮中添加被黄曲霉毒素污染的花生粕会显著降低肉鸡的22~42天的平均日增重（P＜0.05），在发霉日粮中添加了低、中、高三个水平的邦霉解ANSB060后，其肉鸡平均日增重提高，达到正对照组的水平（P＞0.05）；尤其在添加了1000 g/t 和2000 g/t 两个水平的邦霉解ANSB060后，肉鸡日增重显著高于负对照组（P＜0.05）。而在正常日粮中添加邦霉解ANSB060则对肉鸡的平均日增重没有显著性影响（P＞0.05）。肉鸡的平均日采食量并没有因为不同的处理而显示出显著性差异（P＞0.05）。
负对照组即在日粮中添加了被黄曲霉毒素污染的花生粕，其肉鸡的料肉比显著高于正对照组（P＜0.05）；在负对照组的基础上，在日粮中添加500 g/t、1000 g/t以及2000 g/t的邦霉解ANSB060，可显著降低肉鸡的料肉比（P＜0.05）；尤其在1000g/t以及2000 g/t的水平上，与正对照差异不显著（P＞0.05）。
表1-3 邦霉解ANSB060对饲喂黄曲霉毒素霉变花生粕肉鸡的7~21天生产性能的影响（N=6）
Table 1-3 Effect of BMJ ANSB060 on the performance of the broilers fed by moldy peanut meal during 7~21 d（N=6）
|
组别 |
21天体重（g） |
平均日增重 （g/只﹒天） |
平均日采食量 （g/只﹒天） |
料肉比 |
|
C（正对照） |
844.19±8.85ab |
48.25±0.49ab |
70.19±0.48ab |
1.46±0.01 |
|
T（负对照） |
834.23±7.42b |
47.84±0.63ab |
70.84±1.06ab |
1.48±0.02 |
|
C+500BMJ |
838.33±4.25b |
47.85±0.69ab |
69.43±0.25ab |
1.45±0.02 |
|
C+1000BMJ |
828.81±7.94b |
47.30±0.75ab |
69.09±0.95ab |
1.46±0.01 |
|
T+500BMJ |
838.46±9.22b |
47.86±0.76ab |
70.38±1.21ab |
1.47±0.01 |
|
T+1000BMJ |
839.25±8.52b |
46.13±0.52b |
68.49±0.53b |
1.49±0.01 |
|
T+2000BMJ |
863.84±7.86a |
49.12±0.61a |
71.10±0.59a |
1.45±0.01 |
注:同一列数据肩标不含相同字母者表示差异显著(P<0.05)，下同。
表1-4 邦霉解ANSB060对饲喂黄曲霉毒素霉变花生粕肉鸡的21~42天生产性能的影响（N=6）
Table 1-4 Effect of BMJ ANSB060 on the performance of the broilers fed by moldy peanut meal during 21~42 d（N=6）
|
组别 |
42天体重（g） |
平均日增重 （g/只﹒天） |
平均日采食量 （g/只﹒天） |
料肉比 |
|
C（正对照） |
2391.01±24.03a |
73.66±1.68a |
134.56±2.11 |
1.86±0.02cd |
|
T（负对照） |
2257.00±35.65b |
67.75±1.49b |
132.34±1.47 |
1.97±0.02a |
|
C+500BMJ |
2326.80±31.96ab |
70.88±1.56ab |
133.64±2.03 |
1.89±0.02bcd |
|
C+1000BMJ |
2353.95±25.53a |
72.32±1.21a |
137.36±2.22 |
1.90±0.01bc |
|
T+500BMJ |
2339.78±29.97ab |
71.49±1.20ab |
137.07±1.75 |
1.92±0.02b |
|
T+1000BMJ |
2353.82±17.28a |
72.72±0.60a |
133.47±1.71 |
1.84±0.03d |
|
T+2000BMJ |
2381.04±22.24a |
72.41±0.86a |
136.73±1.41 |
1.89±0.01bcd |
表1-5中列出了试验全期，也就是从7日龄至42日龄肉鸡的生产性能变化。其中，负对照组的肉鸡平均日增重显著低于正对照组（P＜0.05），而在负对照组的基础上，在发霉日粮中添加邦霉解ANSB060，可显著提高肉鸡的平均日增重（P＜0.05），并且使其达到正对照组的水平（P＞0.05）。不同处理之间肉鸡的全期平均日采食量无显著差异（P＞0.05）。但负对照组的料肉比却显著高于正对照组，添加了邦霉解ANSB060后，改善了饲料利用效率，尤其在处理T+1000BMJ以及T+2000BMJ中，其料肉比显著低于负对照组（P＜0.05），并且与正对照组差异不显著（P＞0.05）。
表1-5 邦霉解ANSB060对饲喂黄曲霉毒素霉变花生粕肉鸡的试验全期的生产性能的影响（N=6）
Table 1-5 Effect of BMJ ANSB060 on the performance of the broilers fed by moldy peanut meal during 7~42 d（N=6）
|
组别 |
平均日增重 （g/只﹒天） |
平均日采食量 （g/只﹒天） |
料肉比 |
|
C（正对照） |
62.60±0.69a |
110.23±1.64 |
1.74±0.01c |
|
T（负对照） |
59.16±0.91b |
107.34±0.95 |
1.82±0.01a |
|
C+500BMJ |
61.67±0.88a |
107.96±1.13 |
1.75±0.01bc |
|
C+1000BMJ |
62.50±0.72a |
110.19±1.29 |
1.76±0.01bc |
|
T+500BMJ |
62.04±0.84a |
110.40±1.19 |
1.78±0.01b |
|
T+1000BMJ |
62.08±0.30a |
107.42±1.07 |
1.75±0.01bc |
|
T+2000BMJ |
63.09±0.57a |
110.48±0.85 |
1.74±0.01c |
3.2邦霉解ANSB060对饲喂黄曲霉毒素霉变花生粕肉鸡肉品质的影响
表1-6显示正对照组与其它处理组之间，无论是腿肌还是胸肌，其蒸煮损失及剪切力均差异不显著（P＞0.05）。
表1-6 邦霉解ANSB060对饲喂黄曲霉毒素霉变花生粕肉鸡的胸肌、腿肌的蒸煮损失以及剪切力的影响（N=6）
Table 1-6 Effect of BMJ ANSB060 on the shear force and cooking loss of thigh muscles and breast muscle from the broilers fed by moldy peanut meal（N=6）
|
组别 |
胸肌蒸煮损失（%） |
腿肌蒸煮损失（%） |
胸肌剪切力（N） |
腿肌剪切力（N） |
|
C（正对照） |
22.56±3.85 |
24.17±3.21 |
19.9±4.2 |
16.8±2.8 |
|
T（负对照） |
26.17±4.09 |
28.05±3.26 |
22.0±5.6 |
19.3±3.3 |
|
C+500BMJ |
23.83±2.50 |
26.10±3.54 |
25.4±7.7 |
17.9±2.9 |
|
C+1000BMJ |
25.77±7.23 |
25.61±7.61 |
23.4±6.8 |
19.3±2.5 |
|
T+500BMJ |
22.54±4.70 |
26.60±5.55 |
20.0±3.2 |
17.2±3.6 |
|
T+1000BMJ |
23.58±3.09 |
28.43±5.02 |
24.1±7.8 |
19.3±2.0 |
|
T+2000BMJ |
23.41±3.61 |
26.81±3.37 |
22.2±5.3 |
19.2±2.9 |
不同处理对胸肌的45min、24h的pH值以及24小时内pH下降值的影响差异均不显著（P＞0.05）。但对腿肌的pH值却有一定的影响；其负对照组的45min的pH值低于正对照组，但差异不显著（P＞0.05）。添加了邦霉解ANSB060后，其值显著提高（P＜0.05），而在正对照组添加邦霉解ANSB060后无显著性变化（P＞0.05）。
不同处理对肉鸡胸肌肉色的亮度L*无显著性影响（P＞0.05）。但对于红度a*，负对照组的a*值低于正对照组，但差异不显著（P＞0.05）；在负对照中添加邦霉解ANSB060，其a*也显著提高（P＜0.05）。对于黄度b*，负对照组的b*值显著高于正对照组（P＜0.05），在添加了邦霉解ANSB060后有所降低，其中T+1000BMJ和T+2000BMJ处理组与正对照组差异不显著（P＞0.05）。
对于腿肌肉色，不同处理的亮度L*和红度a*差异不显著（P＞0.05）。但负对照的黄度b*值与正对照相比有升高的趋势，但是差异并不显著（P＞0.05）；而在发霉日粮中添加邦霉解ANSB060后，其值与对照组差异亦不显著（P＞0.05）。
表1-7 邦霉解ANSB060对饲喂黄曲霉毒素霉变花生粕肉鸡的胸肌、腿肌的pH值的影响（N=6）
Table1-7 Effect of BMJ ANSB060 on the pH value of thigh muscles and breast muscle from the broilers fed by moldy peanut meal（N=6）
|
组别 |
胸肌 |
腿肌 |
||||
|
|
pH(45min) |
pH(24h) |
pHd |
pH(45min) |
pH(24h) |
pHd |
|
C（正对照） |
6.42±0.25 |
5.89±0.06 |
0.53±0.25 |
6.48±0.24ab |
6.20±0.10 |
0.28±0.25 |
|
T（负对照） |
6.47±0.18 |
5.88±0.05 |
0.59±0.20 |
6.29±0.17b |
6.08±0.08 |
0.20±0.15 |
|
C+500BMJ |
6.31±0.30 |
5.90±0.13 |
0.41±0.26 |
6.46±0.14ab |
6.21±0.11 |
0.25±0.18 |
|
C+1000BMJ |
6.40±0.21 |
5.90±0.09 |
0.50±0.21 |
6.54±0.13a |
6.19±0.09 |
0.36±0.16 |
|
T+500BMJ |
6.45±0.15 |
5.86±0.05 |
0.58±0.14 |
6.57±0.21a |
6.19±0.07 |
0.38±0.19 |
|
T+1000BMJ |
6.49±0.15 |
5.90±0.07 |
0.59±0.14 |
6.53±0.14a |
6.15±0.08 |
0.38±0.07 |
|
T+2000BMJ |
6.50±0.17 |
5.89±0.06 |
0.61±0.16 |
6.54±0.15a |
6.20±0.21 |
0.34±0.10 |
表1-8 邦霉解ANSB060对饲喂黄曲霉毒素霉变花生粕肉鸡的胸肌、腿肌肉色的影响（N=6）
Table1-8 Effect of BMJ ANSB060 on the colour of thigh muscles and breast muscle from the broilers fed by moldy peanut meal（N=6）
|
组别 |
胸肌 |
腿肌 |
||||
|
|
L* |
a* |
b* |
L* |
a* |
b* |
|
C（正对照） |
47.25±3.31 |
20.86±1.39ab |
24.86±1.39b |
53.82±2.77 |
6.85±1.49 |
17.64±2.86ab |
|
T（负对照） |
46.82±3.10 |
18.95±3.07b |
28.18±3.02a |
54.61±1.51 |
6.07±1.72 |
19.20±3.13a |
|
C+500BMJ |
48.89±2.25 |
21.41±2.24ab |
27.33±2.49ab |
54.96±2.11 |
7.24±1.76 |
16.23±3.60b |
|
C+1000BMJ |
49.28±2.71 |
23.21±3.03a |
27.19±4.70ab |
54.64±1.89 |
7.44±1.62 |
18.58±3.30ab |
|
T+500BMJ |
49.33±2.16 |
24.08±3.08a |
28.57±1.87a |
55.56±1.59 |
7.05±1.28 |
19.31±1.95a |
|
T+1000BMJ |
48.81±1.85 |
23.07±2.76a |
27.15±1.27ab |
54.48±1.15 |
7.08±1.39 |
19.56±2.17a |
|
T+2000BMJ |
47.27±3.16 |
23.90±3.30a |
26.04±4.03ab |
54.41±1.89 |
6.91±1.31 |
19.66±1.97a |
3.3邦霉解ANSB060对饲喂黄曲霉毒素霉变花生粕肉鸡组织器官重量的影响
表1-9显示饲喂霉变花生粕对肉鸡心脏、肝脏、脾脏以及法氏囊重量以及器官指数的影响差异不显著（P＞0.05）。
表1-9 邦霉解ANSB060对饲喂黄曲霉毒素霉变花生粕肉鸡器官指数的影响（N=6）
Table 1-9 Effect of BMJ ANSB060 on the organic indexes of the broilers fed by moldy peanut meal（N=6）
|
组别 |
心脏指数(g/kg) |
肝脏指数(g/kg) |
脾脏指数(g/kg) |
法氏囊指数(g/kg) |
胸腺指数(g/kg) |
|
C（正对照） |
3.33±0.35 |
22.90±2.00 |
1.08±0.26 |
0.51±0.10 |
1.45±0.33 |
|
T（负对照） |
3.22±0.43 |
23.93±2.54 |
1.11±0.28 |
0.61±0.16 |
1.72±0.18 |
|
C+500BMJ |
3.12±0.32 |
23.07±1.74 |
1.06±0.25 |
0.61±0.11 |
1.30±0.11 |
|
C+1000BMJ |
3.15±0.43 |
22.80±1.67 |
1.20±0.30 |
0.54±0.10 |
1.35±0.48 |
|
T+500BMJ |
3.10±0.44 |
23.23±1.70 |
1.14±0.21 |
0.62±0.12 |
1.56±0.60 |
|
T+1000BMJ |
3.30±0.28 |
23.52±2.52 |
1.22±0.20 |
0.61±0.13 |
1.83±0.46 |
|
T+2000BMJ |
3.14±0.36 |
23.76±0.88 |
1.16±0.21 |
0.57±0.14 |
1.74±0.63 |
3.4邦霉解ANSB060对饲喂黄曲霉毒素霉变花生粕肉鸡血清蛋白及转氨酶的影响
本研究中，邦霉解ANSB060对饲喂发霉玉米肉鸡的血液中的蛋白含量及转氨酶活性的影响见表1-10。对于血清白蛋白（ALB），负对照组含量虽低于正对照组，但其差异并不显著（P＞0.05）。血清中总蛋白（TP）的含量，在不同的处理组中差异均不显著（P＞0.05）。
表1-10 邦霉解ANSB060对饲喂发霉玉米的肉鸡的血清蛋白及转氨酶活性的影响（N=6）
表1-10 The effect of BMJ ANSB060 on the protein and the transaminase in serum of the broilers fed by moldy peanut meal（N=6）
|
处理 |
TP（g/L） |
ALB（g/L） |
GOT（IU/L） |
GPT（IU/L） |
|
C（正对照） |
25.88±2.18 |
30.96±2.55ab |
34.25±2.20b |
2.08±1.06 |
|
T（负对照） |
23.87±2.31 |
29.02±2.74bc |
47.14±1.63a |
1.97±0.62 |
|
C+500BMJ |
25.25±2.63 |
28.10±3.19c |
33.70±3.07b |
1.68±0.49 |
|
C+1000BMJ |
21.57±1.37 |
33.67±2.77a |
36.22±2.20ab |
2.20±1.01 |
|
T+500BMJ |
22.74±1.94 |
31.50±2.57ab |
48.29±1.55a |
2.19±1.07 |
|
T+1000BMJ |
21.91±3.22 |
30.74±3.71b |
41.45±1.98ab |
2.03±1.10 |
|
T+2000BMJ |
24.04±2.20 |
27.81±3.93c |
31.84±2.46b |
1.83±1.08 |
对于血清中的谷草转氨酶（GOT）的活性，负对照显著高于正对照（P＜0.05），在发霉日粮中添加邦霉解ANSB060，有降低谷草转氨酶的趋势，尤其在添加量为1000 g/t 及2000 g/t时，其酶活与正对照相比差异不显著（P＞0.05），且当添加2000g/t时，其谷草转氨酶的活性显著低于负对照组（P＜0.05）；在正对照中添加邦霉解ANSB060，无论添加量的高低，其酶活均与正对照组差异不显著（P＞0.05）。邦霉解ANSB060对饲喂发霉玉米的肉鸡的谷丙转氨酶（GPT）的活性影响差异不显著（P＞0.05）。
4讨论
4.1邦霉解ANSB060对饲喂黄曲霉毒素霉变花生粕肉鸡生产性能的影响
大量的研究都证实了黄曲霉毒素对肉鸡生产性能有一定的负面影响，可以降低肉鸡的日增重，采食量，并且对其饲料转化效率有负面影响。Raju and Devegowda研究发现，在日粮中添加0.3 mg /kg 的黄曲霉毒素B1，会使肉鸡的35日龄体重降低21%；日粮AFB1含量为0.8 mg /kg时，肉鸡的28日龄的平均日增重将降低10%；当日粮AFB1含量升高到1 mg /kg时，肉鸡的21日龄平均日增重减少10%，42日龄体重降低15%。 近期关于黄曲霉毒素对肉鸡生产性能的影响大多集中在低毒素水平上，这主要是因为和实际生产中饲料的黄曲霉毒素污染水平较为接近。当日粮中AFB1的含量降至0.02mg /kg，连续饲喂三周后，仍可表现出对肉鸡的生长抑制作用，能够降低5%的平均日增重，并且与对照组相比差异显著(P < 0.05)。 侯然然用含有0.1 mg /kg黄曲霉毒素B1的日粮饲喂肉鸡，能够显著降低肉鸡的平均日增重、采食量以及饲料转化效率。通过前人的研究发现，AFB1确实对肉鸡的生长性能具有抑制作用，但其负面影响并没有随着日粮中黄曲霉毒素的增加而升高，这可能是由于研究所选取的鸡品种不同、饲喂条件、毒素添加方式的不同而造成的差异。
在本研究中，日粮中含有被黄曲霉毒素污染的花生粕，肉鸡的体重、平均日增重以及饲料转化效率显著降低；其中饲喂五周后，肉鸡的平均体重较对照组降低5.6%，平均日增重降低8.0%，饲料转化效率降低了5.9%，且差异均显著，这些结果与前人的研究具有很强的一致性。采食了被黄曲霉毒素污染的日粮后，会使动物精神倦怠、生长受阻，饲喂5周后，不同处理肉鸡的状态以及体重有了显著差异，见图片1-2。明显可见，负对照组的肉鸡精神萎靡、个体较小，而在负对照组加入邦霉解ANSB060后，肉鸡的健康状况有了改善，其体型与正对照组差异不显著。
将邦霉解ANSB060应用到蛋鸡生产中会产生类似的作用效果。赵丽红等通过动物试验发现，随着饲料中黄曲霉毒素浓度的升高，蛋鸡的产蛋率也随之显著降低，饲料利用效率呈下降趋势；但是在发霉饲料中添加邦霉解ANSB060，能有效改善这一状况，使产蛋率提高，恢复到正常水平。
众所周知，小肠是营养消化吸收最重要的部位，而Kana等.、 Yunus 等和Kumar and Balachandran研究表明，肉鸡在采食了含有黄曲霉毒素的日粮后，小肠单位面积对营养的吸收效率降低。另有研究证明，由于葡萄糖的吸收是与钠离子结合从而穿过细胞的过程，肉鸡连续七周采食含有0.6mg/kg黄曲霉毒素的日粮后，其小肠粘膜中的Mg2+(Na+/K+)-ATP的活性被抑制，从而降低了葡萄糖的吸收。Osborne、Hamilton和Mathur等发现，日粮中的黄曲霉毒素能够降低肉鸡消化道中胰淀粉酶、胰岛素、脂肪酶、核糖核酸酶以及脱氧核糖核酸酶的活性。并且，黄曲霉毒素对肠道微生物菌群也有一定的影响，研究表明AFB1能够抑制肠道微生物对氧气以及菊粉的摄取，使其产生大量的氧自由基以及甲醛，造成细胞膜受损，使胞内物质渗出。肠道的各种功能由于黄曲霉毒素的影响而异常，从而影响了营养物质的消化吸收，从而对肉鸡的生产性能产生了负面效应。而邦霉解ANSB060的添加，有缓解这一损伤的作用，本身邦霉解ANSB060的主要成分为枯草芽孢杆菌，是一种作用效果十分良好的动物生长性能促进剂，并且这一作用在试验二中也得到了印证。
不仅如此，肾脏同样也是黄曲霉毒素作用的靶器官之一。Karaman等研究表明，在饲料中添加黄曲霉毒素会对肾脏的组织器官造成一定的影响，使肾脏中毒，主要表现在肾小管扩张，上皮细胞退化、凋亡、脱落，刷状缘细胞破损，浆细胞空泡化，组织炎性细胞间质浸润。这些病变使肾脏功能受损，众所周知，肾脏的重吸收作用会将小管液中的全部葡萄糖、氨基酸、部分电解质被重吸收，使这些营养物质重新被动物机体所利用。而被黄曲霉毒素破坏后，造成了大量养分的流失，从另一方面说明了动物生产性能下降的原因。
图-1-2 不同处理肉鸡的状态以及个体差异
Figure 1-2 The healthy states of broilers in different treatments
注：左一为正对照组，中间为负对照组，右一为在负对照组中加入邦霉解ANSB060。
4.2邦霉解ANSB060对饲喂黄曲霉毒素霉变花生粕肉鸡肉品质的影响
肉的颜色和嫩度是衡量肉制品质量优劣以及影响人们选购的重要因素，因此，这也是肉鸡生产中的关键点。包括饲料中的霉菌毒素在内的多种因素都对肉品质有着直接或者间接的影响。在本研究中，虽然肉的嫩度并没有受到黄曲霉毒素以及邦霉解ANSB060的影响，但是肉色却发生一定的变化，在饲料中添加被黄曲霉毒素污染的花生粕后，无论对于胸肌还是腿肌，其b*值都高于对照组，这与前人的研究结果具有一定的一致性。这种颜色变化要归因于系统的氧化损伤和酶活性的降低，从而使肉中肌红蛋白的减少。霉菌毒素会导致动物体内脂质过氧化物的堆积以及氧化损伤，这是由于黄曲霉毒素介导的细胞及DNA的变异失活。但目前并没有直接的证据证明肉色的变化与动物体内的氧化损伤有关，需要进一步通过试验证实。
邦霉解ANSB060不仅对饲喂了发霉饲料的肉鸡的肉品质有一定的影响，对蛋鸡的蛋品质同样也有一定的改善作用。Ma等研究发现，随着饲料中黄曲霉毒素含量的增加，鸡蛋的蛋壳强度显著降低，在添加邦霉解ANSB060后，恢复到正常水平。这可能是由于黄曲霉毒素对养分的正常代谢产生了一定的影响。众所周知，维持蛋壳强度的主要物质是Ca2+，蛋壳中的钙离子主要来源于血液，而黄曲霉毒素会减少血液中的钙含量。这主要是因为黄曲霉毒素会损伤肾小管，影响钙离子的重吸收作用。进一步的肾脏组织切片验证了这一推断，采食了被黄曲霉毒素污染的日粮后，蛋鸡的肾小管刷状缘细胞破损、脱落，严重影响了营养物质的重吸收。
赵丽红等还发现饲料中的黄曲霉毒素会降低蛋黄颜色，添加邦霉解ANSB060后能够缓解这一症状。这可能是由于黄曲霉毒素影响铁在肉鸡体内的代谢和吸收，而且会减少胆盐的产量，造成脂肪和类胡萝卜素的吸收，从而导致皮肤和蛋黄色素沉着较少，导致“白鸡病”。
4.3邦霉解ANSB060对饲喂黄曲霉毒素霉变花生粕肉鸡血清蛋白及转氨酶的影响
肝脏是黄曲霉毒素攻击的最重要的靶器官。血清总蛋白、白蛋白含量以及谷草转氨酶和谷丙转氨酶的活性是衡量动物肝脏功能正常的极其重要的指标。其中总蛋白和白蛋白在血清中的含量的高低是肝脏蛋白质合成系统是否正常运转的重要指标。
在本研究中，负对照组的血清总蛋白虽然与正对照组差异不显著，但是确实是有降低的趋势，这和前人的研究还是具有一定的一致性的；Raju和Devegowda研究证明在肉仔鸡的日粮中添加0.3mg/kg的黄曲霉毒素B1会使肉鸡血清的总蛋白含量在21天和35天都呈现显著下降的趋势；Edrington等的研究结果也得出了相似的结论；还有一些研究表明，日粮中含有黄曲霉毒素不仅会降低血清中的总蛋白含量，其白蛋白含量也有显著的降低。这在本研究中没有显现，可能与饲养方式以及毒素的添加量有关，本试验中毒素的最高添加量为70μg/kg，而在以往的研究中，毒素含量高于1.0mg/kg时，血清总蛋白的降低才呈现显著性的趋势。对于衡量肝脏功能是否正常的另一个指标----转氨酶的活性，在本研究中，谷草转氨酶的活性由于日粮中黄曲霉毒素的添加而升高；这与前人的研究具有一致性。Valdivia等发现，在Hubb肉鸡的饲料中添加3mg/kg的黄曲霉毒素B1，其血清总蛋白降低的同时，谷草转氨酶活性显著升高； Yildirim等研究表明，在饲料中添加2mg/kg的黄曲霉毒素混合物（以黄曲霉毒素B1为主，同时含有黄曲霉毒素B2、G1以及G2），其谷草转氨酶显著低于对照组，但是对谷丙转氨酶的活性却没有影响，与本研究的结论十分一致；不仅如此，其他的一些研究同样表明了黄曲霉毒素具有提高血清谷草转氨酶活性的作用。
图1-3 负对照组病死的肉鸡肝脏的病变图
Figure 1-3 Photo of broiler’s liver in the negative control group
Ma等在蛋鸡试验中发现了类似的现象，饲料中的黄曲霉毒素会降低血清中的总蛋白含量，同时升高谷草转氨酶、谷丙转氨酶的活性，与本研究的结果类似。不仅如此，蛋鸡试验中还观察到，随着霉菌毒素在饲料中的添加，肝脏中的SOD和GSH-Px活性被抑制，造成过氧化物堆积；而在饲料中添加邦霉解ANSB060，能显著改善这些不良反应，提高血清中总蛋白含量，使转氨酶恢复到正常水平，并且增强SOD和GSH-Px的活性。
肝脏是动物体中受黄曲霉毒素影响最为严重的器官。长期低剂量的接触黄曲霉毒素是导致人类肝癌的很重要的诱因。图1-3显示了在本试验中负对照处理的病死肉鸡的肝脏病变。黄曲霉毒素B1在动物体内会转变为AFB1-8,9-环氧化物，它会与DNA、RNA以及蛋白质结合，这个过程不仅会诱导癌症，更会引起抗氧化酶的失活，引起脂质过氧化物堆积，当其堆积超过细胞的承受范围，则会引起细胞以及组织的脂质过氧化损伤，从而造成DNA、RNA、细胞膜的脂质结构以及酶受损失活，引起肝脏细胞变性、纤维化、胆管增生、脂肪堆积等。肝脏组织的病变，引起其功能的异常，转氨酶从胆管中流失，蛋白合成系统功能受阻。而在添加了邦霉解ANSB060后，无论是血清中的总蛋白含量，还是谷草转氨酶的活性都趋于正常，其有很好的保护动物健康、促进生产性能的作用。
5小结
1、 饲喂发霉花生粕的负对照组的肉鸡体重、平均日增重以及饲料转化效率显著降低，在发霉饲料中添加邦霉解ANSB060，能够显著改善肉鸡的生产性能，使其维持正常水平，且这种改善效果随着邦霉解ANSB060添加量的增加而加大。
2、 添加了发霉花生粕的负对照组的肉鸡腿肌的45min pH值显著低于对照组，添加了邦霉解ANSB060后，其值显著提高，且与正对照组差异不显著。
3、 发霉花生粕日粮会提高肉鸡血清中谷草转氨酶活性，而邦霉解ANSB060可改善这种趋势，降低转氨酶活性。
